2022 年 11 月 30 日发表于

Journal of Pharmaceutical Analysis

摘要

组蛋白赖氨酸甲基转移酶(KMT)的可逆和精确的时间和空间调控对于表观基因组 稳态至关重要。KMT 失调与肿瘤发生、转移、化学耐药性、侵袭性和免疫微环境有关。在治疗上，它们的良好效果正在各种临床前和临床试验中进行评估，并在多种恶性肿瘤中显示出令人鼓舞的结果。在这篇综述中，我们更新了对 KMT 功能及其靶向抑制剂开发的最新理解。首先，我们提供了几种 KMT 活动在肿瘤发生、肿瘤抑制和免疫调节中的调节作用的最新概述。此外，我们总结了当前在不同癌症类型中的靶向策略和多个正在进行的与 KMT 抑制剂联合疗法的临床试验。总之，我们努力描述 KMT 介导的表观遗传景观的调控，并提供癌症治疗中潜在的表观遗传靶点。

1.引言

真核基因表达是一个复杂的过程，受遗传和表观遗传事件在许多不同层面的相互作用调控，包括染色质的可及性、转录、RNA 加工和稳定性、翻译和蛋白质活性。表观遗传学是生物学的一个分支，其概念是由英国生物学家康拉德·沃丁顿提出的：基因表达的可遗传变化，无需改变DNA 序列。随着表观遗传学领域的扩展，表观遗传改变被分为四个水平的基因表达调控：DNA甲基化、组蛋白修饰、染色质重塑、非编码RNA调控。

基因组 DNA缠绕组蛋白八聚体（H2A、H2B、H3 和 H4）形成核小体，核小体进一步折叠和压缩，在各个层面形成染色质。组蛋白甲基转移酶(HMT) 是影响基因转录、DNA 复制和DNA 修复的表观遗传“写入者” ，通过催化甲基转移到组蛋白 H3和 H4末端的特定赖氨酸侧链，在维持染色质稳定性和调节基因表达方面发挥重要作用。根据其靶残基，HMT 可分为两大家族，即组蛋白赖氨酸甲基转移酶(KMT) 和蛋白质精氨酸甲基转移酶。大多数生物甲基化反应由以S-5′-腺苷- l -蛋氨酸 (SAM) 为甲基供体的甲基转移酶催化，人类基因组编码了大约 100 种推定的 KMT 候选物。KMT 是一类催化甲基从辅因子 SAM转移到组蛋白和非组蛋白底物的赖氨酸残基的酶根据赖氨酸侧链ε-氮上甲基基团的数量，赖氨酸残基上会形成单甲基化、二甲基化和三甲基化基团（Kme1、Kme2和Kme3），三甲基化的三聚体通常被认为是最有效的机械标记。

第一个经过生化表征的赖氨酸甲基转移酶于 2000 年被描述。迄今为止，人类基因组中已发现49个HMT ，研究最广泛的组蛋白甲基化位点包括组蛋白H3的赖氨酸4（H3K4）、赖氨酸9（H3K9）、赖氨酸27（H3K27）、赖氨酸36（H3K36）、赖氨酸79（H3K79）和组蛋白H4的赖氨酸20（H4K20）组蛋白 3 上不同氨基酸残基的甲基化与不同的转录效应相关。H3K4me2/3、H3K36me3 和 H3K79me1/2 通常与转录激活有关，而 H3K9me2/3、H3K27me2/3 和 H4K20me 与转录抑制有关 这些修饰在许多生物过程中发挥重要作用，包括异染色质的形成、转录调控、DNA损伤修复、细胞生长、代谢和信号转导。除了组蛋白甲基化外，其他翻译后组蛋白修饰（如乙酰化和泛素化）也在生物过程中传递各种调控信号中发挥关键作用。端粒沉默破坏因子 1 (DOT1) 引起的 H3K79甲基化是跨组蛋白串扰的一个突出例子，即一个组蛋白修饰影响另一个组蛋白修饰的过程。该研究表明，赖氨酸16乙酰化（H4K16ac）和组蛋白H2B 泛素化（H2BUb）变构刺激了DOT1对H3K79甲基化。

据报道，HMT 与多种癌症和疾病的发展密切相关，其作为治疗靶点的潜力是无限的。在过去十年中，针对参与组蛋白甲基化和表观遗传调控的KMT的药物开发取得了重大进展，但与其他治疗药物相比，这些药物处于相对早期的阶段。2020年，美国食品药品监督管理局（US FDA）批准了第一个KMT抑制剂（他泽司他用于治疗上皮样肉瘤（ES），随后用于治疗滤泡性淋巴瘤）。

在这篇综述中，我们概述了 KMT 在癌症中的生物学作用及其抑制剂在治疗用途方面的发展，强调了最近的发现和与其他治疗方法相结合的价值（图1)。首先，我们讨论了 KMT 的分类，其中几个在以前的研究中被广泛描述为药物靶点，例如zeste 同源物 2 增强子(EZH2)、端粒沉默 1 样破坏因子 (DOT1L) 和常染色质组蛋白赖氨酸甲基转移酶 2（也称为 G9a）。然后，我们描述了针对这些靶点的抑制剂的研究进展，重点介绍了 KMT 抑制剂与其他药物联合在癌症治疗中的可能意义。EZH2 的临床应用是 KMT 抑制剂研究的一大进展，表明 EZH2 和其他 KMT 抑制剂在癌症治疗方面具有巨大的潜力。它们也可以与常规治疗方式联合使用，除了与经典化疗药物和小分子靶向药物发挥协同作用外，EZH2和G9a还可以辅助免疫检查点治疗取得更好的疗效。

图1.癌症治疗中潜在的表观遗传靶点及联合策略。（A）组蛋白赖氨酸甲基转移酶（KMTs）的肿瘤生物学功能。（B）KMTs的潜在表观遗传靶点。（C）与传统肿瘤治疗（化疗、靶向治疗、免疫治疗）的联合策略。APC细胞：抗原呈递细胞；NK细胞：自然杀伤细胞；EZH2：zeste 增强子同源物 2；G9a：常染色质组蛋白赖氨酸甲基转移酶 2；PIK3：磷脂酰肌醇 3-激酶；AKT：蛋白激酶 B ；AMPK：AMP 活化蛋白激酶；PTEN：磷酸酶和张力蛋白同源物；mTOR ：雷帕霉素的机制靶点；ER：雌激素受体；AR：雄激素受体；DOT1L：端粒沉默破坏剂1样；PUMA：p53上调的细胞凋亡调节剂；Bcl-2：B细胞淋巴瘤-2；MYC：髓细胞瘤病。

2. KMT 在癌症中的生物学功能

过去二十年，独立研究小组广泛研究了 KMT 对肿瘤生物学特性的调控作用。对 KMT 的研究揭示了表观遗传调控与肿瘤发生和转移之间的复杂网络。因此，一些 KMT 已被作为治疗靶点，包括EZH2、DOT1L 和 G9a 更好地了解KMT将有助于制定有效的癌症管理策略。

2.1 EZH2 在癌症中

EZH2是多梳抑制复合物 2 (PRC2)的催化组分，其HMT活性可催化组蛋白H3 27 位赖氨酸的三甲基化。PRC2 是一种多梳组蛋白核心复合物，由三个亚基组成：催化亚基EZH2或EZH1、zeste 12 的支架亚基抑制因子和胚胎 外胚层发育 (EED)，可介导染色质压缩和基因抑制。EZH2 作为HMT的功能主要通过其 su(var)3-9、增强子-zeste、trithorax (SET) 结构域实现。EZH2 可以以 PRC2 依赖性或 PRC2 非依赖性方式抑制或共激活转录。除了组蛋白外，它还可以甲基化非组蛋白例如，EZH2 的 PRC2 独立功能参与了 EZH2 与非 PRC2 伙伴（如前列腺癌和乳腺癌中的雄激素受体和核因子-κB）的相互作用。

迄今为止，大量实验结果表明，EZH2 是人类癌症许多方面调控多种基因表达的关键表观遗传调控因子。据报道，淋巴瘤中 EZH2 表达水平升高，肺癌，前列腺癌， 乳腺癌，黑色素瘤,视网膜母细胞瘤和胶质母细胞瘤。值得注意的是，EZH2 会暂时抑制参与 B 细胞分化的基因，并将它们从淋巴结的生发中心撤出。当 EZH2 基因发生突变时，B 细胞无法离开淋巴结的生发中心，最终导致肿瘤形成，如滤泡性淋巴瘤的情况。金等发现 EZH2 在葡萄膜黑色素瘤(UM) 中过度表达，它通过microRNA (miR)-29c-凌乱片段极性蛋白 2-β-catenin信号通路增加癌症干细胞(CSC) 的百分比和自我更新，并通过 Rho-GDP-解离抑制剂-gamma-Rac1 轴促进迁移和侵袭。他们声称 EZH2 可以成为 UM 中一个有吸引力且有前途的治疗靶点。Khan 等人通过分析43 个人类 RB 肿瘤切片的免疫组织化学发现，EZH2 在视网膜母细胞瘤(RB) 组织和细胞系中过表达。EZH2 抑制会以时间和剂量依赖性方式特异性地损害 RB 细胞中的细胞内 ATP 产生。Smith 等人发现了雷帕霉素复合物 1/PRC2 轴的迄今为止未知的 c-Src/机制靶点，该靶点在人类表皮生长因子 受体 2 (ErbB2) 介导的乳腺肿瘤发生中起关键作用。此外，Yang 等人表明 E2F 转录因子 7通过调节 EZH2 介导的磷酸酶和张力蛋白同源物 (PTEN)/蛋白激酶 B (AKT)/雷帕霉素机制靶点通路在胶质母细胞瘤中促进细胞增殖、细胞转移和肿瘤发生。然而，在胶质母细胞瘤中长期抑制 EZH2 可能会促进肿瘤发生，这表明 EZH2 在肿瘤发生中具有双重作用。

有趣的是，EZH2 并不总是发挥致癌基因的作用，许多研究都报道了其肿瘤抑制作用。例如，Shimizu，王等研究发现，EZH2的缺失可以与JAK2-V617F产生协同作用，引发骨髓增生性肿瘤，促进骨髓纤维化。在KRAS驱动的抗体-药物偶联小鼠模型中，EZH2缺失显著促进了Kirsten大鼠肉瘤病毒致癌基因同源物（KRAS）驱动的肺腺癌形成，这表明EZH2可能作为肿瘤抑制因子发挥作用。从机制上讲，EZH2缺失通过解除其靶标胰岛素样生长因子1的抑制来激活AKT和细胞外信号调节激酶。因此，应谨慎考虑对EZH2进行药理学抑制，因为EZH2也可能具有抗肿瘤作用。

EZH2 活性增强的肿瘤通常表现出免疫抑制性 肿瘤微环境(TME) 和免疫治疗抵抗性。最近的研究表明，EZH2 可能通过抑制肿瘤内抗原呈递和免疫细胞迁移以及增强 CD4 + T 调节细胞的抑制活性来促进免疫逃避。相反，抑制EZH2可能会刺激肿瘤抗原的呈递，并增加TME中免疫效应细胞的运输和功能。值得注意的是，许多研究已经证明EZH2可以通过降低肿瘤细胞的免疫原性来调节对肿瘤细胞的免疫反应。总之，推进免疫治疗与表观遗传重编程相结合的补充治疗方法的发展可能是一个有价值的选择。

EZH2 还与靶向药物耐药性有关。EZH2通过激活磷酸肌醇 3-激酶 (PI3K)/AKT 通路诱导非小细胞肺癌 (NSCLC)对吉非替尼产生获得性耐药性。此外，Quan 等人研究发现，EZH2 与表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂 (EGFR-TKI) 耐药性呈负相关。Sun 等证明EZH2通过禽类髓细胞瘤病毒致癌基因细胞同源物(c-Myc)-miR-137-EZH2轴调节卵巢癌的顺铂耐药性。

2.2 癌症中的 DOT1L

DOT1L 是已知的唯一一种催化哺乳动物H3K79甲基化的HMT ，在胚胎发生和造血过程中起着至关重要的作用。DOT1L 与多个过程有关，包括RNA 聚合酶 II的转录延长、 DNA 损伤修复和细胞周期检查点激活 ，在乳腺癌中也观察到了DOT1L的高表达、结直肠癌， 卵巢癌、视网膜母细胞瘤和混合系白血病 (MLL)，DOT1L甲基转移酶在 MLL 融合介导的白血病发生中起着至关重要的作用，这是毋庸置疑的。此外，MLL 融合伴侣与 DOT1L 之间的相互作用通过诱导 DOT1L 的异常募集和异位 H3K79甲基化，促进 MLL 靶基因（如HOXA9簇和髓系亲嗜性病毒整合位点 1 (MEIS1)）的过度表达。52H4Kac/H2Bub/H3K79me 之间的串扰可能提高对 DOT1L 在发育过程和疾病中的作用的先前理解，包括 MLL1/KMT2A（MLL重排）白血病。

除白血病外，据报道，DOT1L 是其他实体肿瘤的潜在治疗靶点，包括卵巢癌、乳腺癌和前列腺癌。Chava 等人发现 DOT1L通过调节细胞凋亡和代谢途径以及自然杀伤 (NK) 细胞介导的卵巢癌根除来促进卵巢癌细胞增殖。最近，Kurani 等人发现 DOT1L 成为三阴性乳腺癌 (TNBC) 和结直肠癌中的关键 CSC 调节剂。Nassa 等人发现 DOT1L 阻断可通过包括雌激素受体 α和叉头框蛋白 A1 基因沉默来降低激素反应性乳腺癌细胞的增殖。另一项研究表明，DOT1L 选择性地调节雄激素受体(AR) 阳性前列腺癌细胞的致瘤性，这表明 DOT1L 在调节核受体方面具有更普遍的作用。总体而言，这一证据为使用 DOT1L 抑制剂与激素疗法治疗癌症提供了理论依据。有趣的是，DOT1L 在紫外线诱发的黑色素瘤发展中起着保护作用，而其在MLL重排白血病中起着致癌作用。

2.3 癌症中的 G9a

G9a 是一种特异性介导 H3K9 单甲基化和二甲基化的 HMT，在抑制基因转录中起着至关重要的作用。多项研究报告称，G9a 在多种癌症中的表达水平升高，包括肝细胞癌、膀胱癌、黑色素瘤、神经母细胞瘤和侵袭性卵巢癌。G9a 的过度表达与癌细胞的恶性行为（例如异常增殖、转移和耐药性）有关，这是通过沉默肿瘤抑制因子或激活上皮-间质转化程序来实现的。刘等人强调了G9a在抑制卵巢癌细胞内源性逆转录病毒中的重要作用。Ke等人发现G9a通过转录调控胶质母细胞瘤中致癌基因c-Myc的表达来控制胶质母细胞瘤细胞的增殖和自噬。敲低G9a基因可诱导染色体不稳定性并抑制癌细胞的增殖和侵袭，支持G9a是一个有前途的药物靶点的观点。

2.4 其他潜在靶点及其在癌症中的作用

SET 结构域双叉组蛋白赖氨酸甲基转移酶1 (SETDB1) 可逆地催化染色体常染色质区域中 H3K9 的二甲基化和三甲基化。在接受免疫检查点阻断(ICB)治疗的小鼠肿瘤模型中，对 936 个染色质调节剂进行体内聚集规律间隔短回文重复序列相关蛋白 9 筛选后，SETDB1 被鉴定为免疫逃逸的介质。此外，还发现 SETDB1 的扩增与人类肿瘤中的免疫排斥和对 ICB 的抵抗有关 。如先前的研究表明，SETDB1代表了免疫治疗的一个新的候选靶点，它的抑制可能使更多的患者对免疫治疗产生反应。

SET 结构域蛋白 2 (SETD2) 是已知的唯一能够在哺乳动物中三甲基化组蛋白 H3的 K36 残基的 HMT。SETD2参与各种细胞过程，并已被证明在一系列实体癌中发生突变，包括肾癌、前列腺癌、胃肠道癌和胰腺癌。有趣的是，SETD2 催化的 H3K36me3 修饰参与与其他染色质标记的串扰，包括拮抗 H3K4me3 和 H3K27me3。此外，Yuan 等人研究发现，SETD2在前列腺癌中的抑癌功能很大程度上依赖于EZH2修饰和AMP活化蛋白激酶信号通路。

SET 结构域蛋白 8 (SETD8) 是唯一能够特异性单甲基化 H4K20 的赖氨酸甲基转移酶，参与转录调控。多项研究已证实SETD8在肿瘤发生发展中发挥重要作用,并与p53等信号通路及活性因子相关，扭曲、缺氧诱导因子，以及无翅/整合（Wnt）/β-catenin信号通路。鉴于SETD8在癌症中的重要作用以及小分子抑制剂的潜力，SETD8选择性抑制剂的开发已产生了强大的化学探针以及高效的抗肿瘤先导化合物。不幸的是，没有SETD8抑制剂进入临床应用。

3. 针对KMT的药物

到目前为止，多种抑制剂在治疗多种癌症方面已显示出令人鼓舞的结果，尤其是对 EZH2、DOT1L、G9a 和 SETDB1 的抑制。在此，我们列出了这些抗 KMT 表观药物图2。

图2.EZH2 、DOT1L、G9a、SETD8、SETD2抑制剂临床前研究及临床试验现状。黑色标记临床前研究，红色标记临床试验。PRMT1 ：蛋白质精氨酸甲基转移酶1；PRMT5：蛋白质精氨酸甲基转移酶5；PRMT6 ：蛋白质精氨酸甲基转移酶6；SET：su(var)3-9，enhancer-of-zeste，trithorax；SETD8：含SET结构域的蛋白8；SUV4-20Hn：组蛋白H4K20甲基转移酶家族结构；DOT1L：端粒沉默破坏因子1样蛋白；SMYDn：含SET和MYND结构域的蛋白家族；NSDn：核受体结合SET结构域蛋白家族；ASH1L：缺失、小或同源样 1；EZH2：zeste 同源物增强子 2；EZH1：zeste 同源物增强子 1；PRMT4：蛋白质精氨酸甲基转移酶 4；SETDB1：SET 结构域分叉组蛋白赖氨酸甲基转移酶 1；G9a：常染色质组蛋白赖氨酸甲基转移酶 2；KMT2n：组蛋白赖氨酸N-甲基转移酶 2 家族。

3.1 针对癌症中的 EZH2

针对EZH2的小分子抑制剂根据作用方式大致可分为三类：（1）最大类为抑制EZH2酶活性的小分子。2020年1月23日，EZH2抑制剂他泽司他（EPZ-6438）获得美国FDA批准，用于治疗无法完全切除的局部晚期或转移性ES。此外，2020年6月18日，美国FDA加速批准他泽司他用于治疗滤泡性淋巴瘤。2016年7月29日至2017年6月2日期间，一项多中心、开放标签的II期研究（NCT02860286) 招募了 74 名恶性胸膜间皮瘤患者，并报告了结果。总体队列的12周疾病控制率为51%（95%可信区间（CI）40%–63%），BAP1失活队列的12周疾病控制率为54%（95%CI42%–67%），远远超过了方案设定的35%的阈值。此外，他泽司他在复发或难治性恶性胸膜间皮瘤患者中表现出良好的安全性和耐受性。他泽司他目前还在研究治疗其他分子驱动的血液系统恶性肿瘤、淋巴瘤、前列腺癌和其他实体肿瘤（例如NCT02601950，NCT04179864， 和NCT04204941)。还有许多其他具有治疗潜力的 SAM 敏感抑制剂，包括 GSK126、CPI-1205，PF-06821497，SHR2554 和valemetostat。GSK126 的临床试验被终止，因为已经达到最大剂量，并且 GSK126 的计划显示临床活性证据不足以证明进一步的临床研究是合理的（NCT02082977)。CPI-0209目前正在对晚期实体瘤和淋巴瘤患者进行I/II期临床试验（NCT04104776)。其他 EZH2 SAM 竞争性抑制剂，包括 PF-06821497、SHR2554 和 CPI-1205，目前正在临床试验中（例如，NCT03460977，NCT03741712， 和NCT02395601)。（2）第二类药物通过破坏PRC2复合物并抑制其与H3K27的相互作用起作用。MAK683是一种小分子EED抑制剂，可阻断EED与H3K27的结合，从而阻止EZH2激活，目前正处于弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）的I/II期试验中（NCT02900651)。（3) 剩下的一组涉及一种有希望的触发 EZH2 降解的新途径。如前所述，EZH2 的非 PRC2 相关活性依赖于作为关键转录因子（包括 AR）的辅激活因子，而不是甲基转移酶催化活性。因此，目前大多数 EZH2 抑制剂仅抑制 EZH2 的催化活性，可能无法抑制其非典型活性。为了开发一种抑制 EZH2 非催化功能的策略，2018 年报道发现了首创的 EZH2 选择性降解剂 56 (MS1943) 。此外，2021年设计了针对EZH2的蛋白水解靶向嵌合体（PROTAC）降解剂MS177。研究表明，MS177在白血病中的抗癌作用比EZH2催化抑制剂和EED降解剂更有效。

总的来说，有许多关键观察结果指出 EZH2 抑制在肿瘤治疗中的潜在作用。然而，EZH2 抑制剂可能通过不同的作用方式在不同类型的肿瘤中发挥致癌或致癌作用，需要进一步评估其针对性治疗应用。

3.2 针对癌症中的 DOT1L

基于催化机制，大多数 DOT1L 抑制剂是SAM分子的模拟物，通过取代或阻断SAM 的结合位点来抑制 DOT1L 活性，例如 EPZ-5676（也称为 pinometostat）、EPZ004777 和溴化类似物 SGC0946。不幸的是，EPZ004777 的药理特性非常低，阻碍了其在治疗中的应用。相比之下，EPZ-5676 具有更优的选择性和药代动力学，并于 2013 年被美国 FDA批准为治疗MLL重排白血病的“孤儿药” 。此外，EPZ-5676 的两项临床试验已完成（NCT02141828和NCT01684150) 显示，临床益处非常有限，51 名患者中只有 2 名出现正式临床反应，因此有必要将 EPZ-5676 与其他抗白血病药物联合使用。EPZ-5657 还正在针对其他实体肿瘤进行多项临床前试验研究。Kurani 等人研究表明，EPZ-5676通过调控TNBC中恶性干细胞的维持或扩增，显著降低肿瘤的生长和转移。此外，Chava等人在2021年证明EPZ-5676显著抑制小鼠异种移植皮下卵巢肿瘤的生长。此外，Wu等人揭示了 DOT1L 与融合伴侣之间的蛋白质-蛋白质相互作用 (PPI) 是潜在的抗癌药物靶点。最近，Cao 等人揭示了 DOT1L 在调节细胞命运决定和转录延长控制中的作用，而不依赖于 H3K79 甲基化。因此，有人提出，降解 DOT1L 而不是仅仅抑制其催化活性可能对癌症治疗更有益。随后，几位研究人员探索了设计一种有效的 PROTAC 或分子胶来降解 DOT1L，这可以作为MLL重排白血病中酶抑制剂的替代方法。相当一部分研究者正在探索和合成一些小分子PPI抑制剂，如MLL1-menin和MLL1-WDR5相互作用抑制剂。

3.3 针对癌症中的 G9a

过去十年，多个独立研究小组对 G9a 抑制剂的抗肿瘤作用进行了广泛研究。因此，已经开发出几种 G9a HMTase 活性的小分子抑制剂，例如基于喹唑啉核心的 BIX-01294，UNC0638 和UNC0642，阻断G9a的H3底物结合位点。研究发现，G9a抑制剂可以通过阻断细胞周期进程、引发细胞凋亡或诱导自噬性细胞死亡来抑制肿瘤生长。然而，BIX01294对胰高血糖素样肽 (GLP) 表现出比 G9a 更高的选择性，而UNC0638由于其药代动力学特性较差，不适合进行动物研究。相比之下，UNC0642 显示出优异的选择性、低细胞毒性和较高的体外细胞效力，以及改善的体内药代动力学特性。吲哚核心分子 A-366 也被确定为 G9a 的 H3 肽的另一种竞争性抑制剂，对 G9a 的选择性比 GLP 更高（即真染色质组蛋白赖氨酸甲基转移酶 1/GLP）。最近，新药 CM-272（一种双重 G9a/DNA 甲基转移酶 (DNMT) 抑制剂）被认为可以诱导造血干细胞分化和生长抑制，强调了肝细胞癌分化治疗的潜力。许多临床前研究表明，G9a 和 EZH2 在几种人类肿瘤中经常同时上调，并通过癌细胞中的白细胞介素 (IL)-24-ER 应激轴协同诱导细胞凋亡。Spiliopoulou 等人于 2022 年发现，G9a 和 EZH2 的双重抑制可以比单独阻断其中一种更有效地诱导趋化因子。此外，组蛋白赖氨酸甲基转移酶抑制剂-1-005 是第一个同时针对两种酶的药物抑制剂，它改变了免疫微环境并减少了卵巢高级别浆液性癌的肿瘤生长。

3.4 针对其他靶点的小分子化合物

多项研究表明，SETDB1 耗竭会减缓细胞周期进程、细胞增殖、体外迁移，并减少体内肿瘤生长。目前影响 SETDB1 功能的药物包括 SET 结构域HMT 抑制剂(chaetocin,3′-deazaneplanocinA,3-deazaneplanocinA (DZNep) 和 miR-381-3p)和 H3K9 甲基化抑制剂（mithramycinA）和 miRNA（miR-621 和miR-29）。遗憾的是，目前已进行临床前测试的SETDB1抑制剂大多为非选择性化合物。值得注意的是，2021年，美国FDA授予首个口服SETD2抑制剂EZM0414快速通道资格，作为复发或难治性DLBCL成人患者的治疗选择。该药物的安全性正在最近启动的I/Ib期研究中进行评估（NCT05121103).Veschi 等人发现 UNC0379（SETD8 抑制剂）通过激活 p53 典型通路为高风险神经母细胞瘤模型带来显著的生存优势。然而，Herviou 等人发现UNC-0379可以在p53缺陷的骨髓瘤细胞中引发p53独立的复制应激。此外，研究发现SETD8抑制与美法仑有很强的协同作用，联合策略可能用于逆转对这种广泛用于多发性骨髓瘤治疗的烷化剂的耐药性。

4. KMT抑制剂组合策略

如上所述，EZH2 和 DOT1L 抑制剂已在临床试验中证明了对肿瘤的治疗效果，而 G9a 和其他 KMT 已在临床前试验中显示出作为癌症治疗靶点的全部潜力。目前，癌症的主要治疗手段包括常规化疗、靶向治疗、免疫治疗。多项联合治疗策略的临床试验和临床前研究也正在陆续展开，在逆转耐药性、增强疗效等方面显示出独特的优势，因此我们重点关注表观遗传治疗与其他治疗方案在癌症治疗中的协同作用。

4.1 KMT 抑制剂与化疗药物的联合应用

由于几种表观遗传疗法作为单一药物疗效有限，因此与传统化疗联合使用已在一系列临床研究中显示出良好的协同作用（图 3，表 1，表 2）。化疗药物通常可分为几类：烷化剂、铂类药物、抗代谢药物、抗生素等。常规化疗药物顺铂、5-氟尿嘧啶(5-FU)、阿霉素等在临床上广泛应用，疗效显著，作用机制明确。

图3 .组蛋白赖氨酸甲基转移酶（KMT）抑制剂在增加化疗药物敏感性方面的分子调控机制。MEIS1：髓系生态型病毒插入位点1；FEN1：瓣状结构特异性内切酶1 ；PUMA：p53上调的凋亡调节剂；STAT3：信号转导和转录激活因子3；miR：微小RNA；HMGA ：高迁移率基因组A；SLC31A1：铜转运蛋白1；GCLC：谷氨酸-半胱氨酸连接酶催化亚基；GSH：谷胱甘肽。

表1.组蛋白赖氨酸甲基转移酶（KMT）与化疗药物联合治疗不同类型癌症的临床试验。

表2 .组蛋白赖氨酸甲基转移酶 (KMT) 与化疗药物联合治疗癌症的临床前研究。

Ramakrishnan 等人发现 EPZ011989 单独使用以及与顺铂联合使用均可增加 NK 细胞浸润，从而促进 HT1376 衍生的异种移植瘤中干扰素 (IFN)-γ 的释放。进一步研究发现，EZH2 抑制介导的 NK 细胞活性增加通过增加多能细胞的细胞毒性或肿瘤细胞分化来增强对顺铂治疗的反应。Tan 等人研究表明，他泽司他联合5-FU在体内外对结直肠癌细胞均有协同抗肿瘤作用。研究发现，他泽司他可以通过上调p53上调的凋亡调节因子来增强5-FU的治疗效果。先前的证据表明，EZH2 /信号转导和转录激活因子3通路在化疗后被激活，并诱导分泌富含miR-378a-3p和miR-378d的外泌体。此外，癌细胞在受到化疗药物刺激后产生的外泌体将miR-378a-3p和miR-378d运送到邻近细胞，激活Wnt和Notch信号通路，诱导耐药性。杨等证明细胞毒药物阿霉素联合EZH2抑制剂他泽司他可有效逆转小鼠肿瘤异种移植模型中化疗引起的外泌体诱导的耐药性。李等人认为，结直肠癌的肿瘤发生和奥沙利铂耐药与细胞外富含亮氨酸重复序列纤连蛋白1-反义RNA 1/EZH2/DNA甲基转移酶3A轴介导的MEIS1下调有关。研究发现，GSK126和奥沙利铂联合用药可以显著逆转耐药细胞对奥沙利铂的耐药性，降低细胞存活率，抑制小鼠肿瘤的生长。Lee等揭示了结肠癌细胞中的 SETDB1 耗竭与 5-FU、伊立替康和奥沙利铂等细胞毒药物相结合，促进了癌症干细胞分化为减数分裂后正常样细胞。

在一项多中心、双盲、安慰剂对照、随机 III 期研究中，正在评估他泽司他联合阿霉素治疗晚期 ES 患者的疗效和安全性，共招募了约 150 名患者（NCT04204941)。PF-06821497 与标准治疗相结合的疗效正在一项开放标签、多中心 I 期研究中接受评估，研究对象为复发/难治性小细胞肺癌(SCLC) 和去势抵抗性前列腺癌 (CRPC) 患者（NCT03460977)。一项非随机 I/II 期临床试验正在评估 DS3201 与伊立替康联合治疗复发性 SCLC 患者的安全性（NCT03879798)。他泽司他与利妥昔单抗、环磷酰胺、长春新碱、多柔比星和泼尼松龙(R-CHOP)联合治疗新诊断的DLBCL和滤泡性淋巴瘤患者仍在 Ib/II 期临床试验中进行评估（NCT02889523）。I 期试验旨在评估联合用药的安全性，并确定他泽司他 II 期的推荐剂量。Ib 期试验招募了 17 名受试者，初步疗效数据令人鼓舞，表明有必要在 II 期试验中进一步研究。此外，II 期试验旨在确定他泽司他对于接受 8 个周期 R-CHOP 治疗的患者是否安全有效 。

研究证实了EPZ-5676 与阿扎胞苷或地西他滨联合治疗MLL重排白血病具有协同抗增殖作用。一项 Ib/II 期临床试验已经完成，该试验旨在研究 EPZ-5676 和氮胞苷联合治疗复发、难治或新诊断的 11q23 重排急性髓系白血病患者的能力（NCT03701295).此外，毛等人提供了临床前证据，证明 EPZ-5676 与依托泊苷联合治疗可显著提高小鼠视网膜母细胞瘤原位异种移植的治疗效果。DOT1L 靶向的双重作用在 RB 细胞中得到验证，干扰 DOT1L 在早期DNA 损伤反应中的直接参与，并下调高迁移率族AT-hook 2的表达，其耗竭可增强 RB 细胞的药物敏感性。

刘等人发现，G9a通过调节头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)中谷氨酸-半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC) 转录起始位点的H3K9me1 水平来提高谷胱甘肽(GSH) 。GSH 已被证明是导致耐药性的主要因素，因为它能够诱导药物结合并消除自由基清除。使用 G9a 抑制剂UNC0638可显着降低顺铂耐药 HNSCC 中的 GCLC 表达，从而逆转耐药性。卵巢癌是被称为“女性杀手”的疾病之一，铂类药物被用作一线治疗。然而，大多数患者最终会对铂类药物产生获得性耐药性，其中近 80% 的患者在 2 年内出现复发性肿瘤。最新研究发现，ZNF711 下调促进了上皮性卵巢癌(EOC) 患者的顺铂耐药性。机制上，ZNF711 的表达降低了 H3K79me2 的水平，从而激活了 SLC31A1 转录，SLC31A1 是一种跨膜蛋白，可以促进顺铂的流入。因此，与 BIX-01294 联合治疗可大大增强 ZNF711 下调的 EOC 细胞对顺铂的敏感性。

4.2 KMT 抑制剂与其他靶向药物的联合应用

尽管 KMT 的突变或异常上调在多种癌症中频繁发生，但 KMT 表观药物的治疗应用仍然存在局限性（表3，表4）。例如，Hirukawa等人发现，EZH2 抑制剂可增强小鼠抗曲妥珠单抗乳腺癌模型中 IFN 驱动的对抗 ErbB2 mAb 疗法的免疫反应。从机制上讲，通过 EZH2 抑制解除逆转录转座子的抑制会触发 I 型IFN反应和细胞毒性白细胞的涌入，从而增强曲妥珠单抗的疗效。此外，AR 抑制剂 SHR3680 与 EZH2 抑制剂 SHR2554 联合使用的效果正在 Ib/II 期研究中接受难治性转移性 TNBC 患者的评估（NCT03805399)。如前所述，磷酸化的EZH2直接激活前列腺癌中的AR基因转录，这表明EZH2抑制和AR靶向治疗可能对CRPC有效。目前正在进行两项 Ib/II 期临床试验，以评估 EZH2 抑制剂与恩杂鲁胺（一种 AR 拮抗剂）或阿比特龙/泼尼松联合治疗转移性 CRPC（mCRPC）的效果（NCT04179864和NCT03480646）。除了新型 AR 靶向疗法外，聚（ADP-核糖）聚合酶抑制剂在 mCRPC 中具有抗肿瘤活性，因为大约 23% 的 mCRPC 会发生DNA 损伤反应改变。一项 Ib/II 期研究正在 mCRPC 患者中测试他拉唑帕尼与他泽美司他联合治疗的安全性、耐受性和初步临床活性（NCT04846478）。

表3 .组蛋白赖氨酸甲基转移酶（KMT）与其他靶向药物联合治疗不同类型癌症的临床试验。

表4 .组蛋白赖氨酸甲基转移酶（KMT）与其他靶向药物联合治疗癌症的临床前研究。

一项 I/II 期临床试验正在评估他泽司他联合 BRAF/MEK 双抑制剂治疗的可能益处和副作用，该试验针对的是 BRAF 突变的转移性黑色素瘤患者，这些患者之前接受过 BRAF/MEK 抑制剂治疗并出现病情进展（NCT04557956)。此外，Fu等人发现使用达拉非尼/司美替尼和他泽司他最终可通过协同抑制 H3K27 的三甲基化来增强含有BRAF V600E的乳头状甲状腺癌(PTC) 细胞的分化并克服对 BRAF 抑制剂治疗的耐药性。

目前，他泽司他联合利妥昔单抗治疗复发/难治性滤泡性淋巴瘤 (R/R FL) 患者的安全性和有效性正在接受评估，这些患者之前至少接受过两种标准全身治疗方案，其中至少一种是基于抗 CD20 的方案（NCT04762160)。一项多中心、双盲、阳性对照、随机三阶段研究旨在评估他泽司他联合来那度胺加利妥昔单抗治疗已完成至少一疗程全身化疗、免疫治疗或化学免疫治疗的 R/R FL 患者的疗效和安全性（NCT04224493）研究表明，umbralisib（一种 PI3K-δ 抑制剂）与ublituximab（一种抗 CD20 单克隆抗体）联合治疗淋巴瘤患者的初步疗效令人鼓舞，值得进一步研究。因此，I/II 期试验旨在评估他泽司他、umbralisib和ublituximab联合治疗R/R FL 患者的安全性和耐受性（NCT05152459）。

Huang 等人发现，应用溴结构域蛋白 4 (BRD4) 抑制剂可以通过干扰 H3K27乙酰化识别来克服对 EZH2i 的耐药性。然而，由于 EZH2-BRD4 抑制剂组合在某些癌症中差异性地激活丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK)，三联组合加上 MAPK 通路抑制剂可能表现出强大的疗效和非常可耐受的毒性。Adelaiye-Ogala 等人提供了一种 EZH2 抑制剂和舒尼替尼的组合策略，可以克服/延缓透明细胞肾细胞癌(ccRCC) 患者的舒尼替尼耐药性。EZH2 表达与转移性疾病相关，并通过自适应激酶重编程降低ccRCC 患者对舒尼替尼的反应。

靶向治疗的使用大大提高了NSCLC患者的生存率。尤其是 EGFR-TKI，包括吉非替尼和厄洛替尼，已被用作携带激活EGFR突变的晚期NSCLC患者的一线治疗。然而，与其他抗癌药物类似，三分之一的患者在 9-13 个月内对 EGFR-TKI 产生获得性耐药性。龚等证明 EZH2 抑制剂（GSK343 或 DZNep）与吉非替尼联合用药可通过下调 EGFR 和 AKT 的磷酸化并诱导 NSCLC 细胞凋亡来逆转 EGFR-TKI 耐药性。多项研究还发现，在结肠癌和胃癌中，抑制 EZH2 和 EGFR 对肿瘤生长和细胞迁移的抑制作用比单药用药更强（图 4A）。

图4.组蛋白赖氨酸甲基转移酶（KMTs）与其他靶向药物联合在癌症中的作用机制。(A）Zeste 同源物 2 抑制剂增强子（EZH2i）与雄激素受体（AR）拮抗剂和表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）药物协同作用，用于肿瘤的靶向治疗。（B）常染色质组蛋白赖氨酸甲基转移酶 2 抑制剂（G9ai）与 EGFR-TKI 和 B 细胞淋巴瘤-2 抑制剂（Bcl-2i）协同作用，用于肿瘤的靶向治疗。（C）端粒沉默破坏子 1 样抑制剂（DOT1Li）与其他表观遗传药物协同作用，用于白血病的靶向治疗。AKT：蛋白激酶 B；PTEN：磷酸酶和张力蛋白同源物；DNMTi：DNA甲基转移酶抑制剂；Cyt c：细胞色素c ；LSD1i：赖氨酸特异性去甲基化酶1抑制剂；MLL：混合系白血病。

此外，还发现G9a与NSCLC的EGFR-TKI耐药有关。Wang等人证明 G9a 通过增加PTEN启动子区 H3K9me2的水平并降低乙酰化来激活 AKT 信号通路，从而导致耐药性。所示 G9a 抑制剂UNC0638与厄洛替尼的组合可通过调节 PTEN/AKT 通路强效抑制细胞生长并诱导 EGFR-TKI 耐药 NSCLC 细胞凋亡。Fresquet 等人发现表观遗传治疗与针对B 细胞淋巴瘤2 (Bcl2) 家族蛋白的药物联合使用在癌症治疗中产生了协同反应。CM-272 加venetoclax被发现能激活内源性逆转录因子识别，增加 ATP水解，从而逆转瓦博格效应，诱导肿瘤坏死凋亡，并增加对 Bcl-2 抑制剂的敏感性（图4B).

研究表明，MLL重排的急性淋巴细胞白血病具有强烈的表观遗传失调和对表观遗传干扰物的敏感性的特征。2015年，陈等人发现，调节器 2 相关酶 1（sirtuin 1，SIRT1）（一种 NAD 依赖性蛋白去乙酰化酶）的激活可能会增强 DOT1L 抑制剂的疗效。从机制上讲，抑制 DOT1L 会导致 SIRT1 依赖性的 H3K9 乙酰化降低、H3K9 甲基化增加以及MLL融合靶基因处染色质可及性的丧失，这突出了 SIRT1 在 DOT1L 抑制后获得受抑制染色质状态的必要性。此外，SIRT1 的小分子激活剂 RT1720 已被证明可以增敏MLL重排的白血病，并与 DOT1L 抑制剂联合使用时表现出增强的抗增殖活性。此外，Feng 等人发现LSD1抑制剂与 DOT1L 抑制剂联合使用可对MLL重排白血病细胞的增殖产生强烈的协同作用。推测 H3K79 高甲基化与MLL重排白血病中 H3K4 甲基化失衡密切相关。最近的研究表明，将 DOT1L 抑制剂 EPZ004777 与 MLL-menin 相互作用抑制剂 (MI-2-2) 联合使用可显著增强各种MLL疾病模型中诱导分化和细胞杀伤的效果。基因表达分析表明，联合治疗对 MLL 融合蛋白和髓细胞瘤病的靶基因的抑制作用更强。此外，刘等人研究发现，DOT1Li-SHP2i组合在人源性异种移植模型中表现出抑制肿瘤生长的协同作用。研究发现，DOT1Li诱导的H3K79甲基化缺失可以促进PREX1基因位点上的H3K79乙酰化，促进PREX1表达和MAPK信号的反馈激活。值得注意的是，研究通过分析18个类似测试的KRAS突变细胞系发现，DOT1Li-SHP2i组合显然对KRAS突变癌症中的不同反应亚群产生影响（图 4C）。

4.3 KMT 抑制剂与免疫疗法的联合应用

免疫疗法，例如免疫检查点抑制剂（ICIs；抗程序性细胞死亡蛋白1（抗PD-1）和抗细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4（抗CTLA-4）抗体），已在不同类型癌症患者中显示出临床益处。然而，在大多数情况下，ICI单药治疗的疗效并不令人满意。因此，寻找更有效、毒性更小的策略来提高肿瘤免疫疗法的疗效引起了研究人员的广泛关注（图5，表5，表6）。

图5 . zeste 同源物 2 抑制剂增强子 (EZH2i) 和真染色质组蛋白赖氨酸甲基转移酶 2 抑制剂 (G9ai) 增强免疫检查点抑制剂(ICI) 反应的机制。APC 细胞：抗原呈递细胞；Treg 细胞：调节性 T 细胞；CXCL：CXC 基序趋化因子配体；MHC ：主要组织相容性复合体；TCR：T 细胞受体；PD-1/PD-L1：程序性细胞死亡蛋白 1/程序性细胞死亡配体 1；EZH2i：EZH2 抑制剂；G9ai：G9a 抑制剂；MAPILC3B：微管相关蛋白 1轻链 3β。

表5.组蛋白赖氨酸甲基转移酶（KMT）联合免疫疗法治疗不同类型癌症的临床试验。

表6.组蛋白赖氨酸甲基转移酶（KMT）与癌症免疫疗法联合治疗的临床前研究。

2015年，Peng等人发现 EZH2 基因表达通过沉默 Th1 型趋化因子 CXCL9和CXCL10与肿瘤浸润淋巴细胞数量呈负相关。由于表观遗传沉默 CXCL9 和 CXCL10 的表达限制了效应 T 细胞肿瘤运输到肿瘤，ICB与 EZH2 抑制剂和DNMT 抑制剂联合使用可显著抑制 ID8 卵巢癌的癌症进展。此外，Ennishi 等人2019 年的一项研究表明，EZH2 突变在主要组织相容性复合体(MHC)-I 和 MHC-II 阴性原发性淋巴瘤中显著增多，并且 EZH2 突变与 MHC 表达缺失之间存在功能性联系。具有临床意义的是，EZH2 抑制剂可显著恢复 EZH2 突变人类DLBCL细胞系中的 MHC 表达，这是其与患者 ICI 协同作用的关键因素。此外，Zingg 等人发现，在用抗 CTLA-4 或 IL-2 免疫疗法治疗的三种黑色素瘤模型中，EZH2 的表达均增加，从而抑制了它们的免疫原性和抗原呈递。进一步的研究表明，EZH2 抑制可逆转这种抗性，并与免疫疗法协同作用以抑制黑色素瘤的生长。由于先前的研究为针对 EZH2 与 ICI 的新型联合策略提供了强有力的理论基础，许多临床试验已经开始。

在一项 I/II 期临床试验中，研究了 EZH2 抑制和抗 PD-1 治疗对晚期尿路上皮癌患者的协同作用（NCT03854474此外，EZH2抑制剂SHR2554与抗PD-L1/转化生长因子β抗体SHR1701联合治疗晚期实体瘤和B细胞淋巴瘤患者的I/II期临床研究正在进行中（NCT04407741)。阿替利珠单抗联合他泽司他治疗复发/难治性弥漫大B细胞淋巴瘤的安全性和药理学Ib期研究已经结束，但迄今为止，结果尚未公布（NCT02220842）。除了上述临床试验外，还有许多研究者在探索新的联合策略。2020年，周等发现，将 GSK126 与抗 PD-1 疗法相结合可能会改善抗 PD-1 耐药 HNSCC 的低反应率并增加治疗敏感性。机制研究表明，EZH2 抑制通过降低 β-2-微球蛋白启动子上的组蛋白 H3K27me3 修饰来上调靶肿瘤细胞抗原呈递。同时，正在对 pembrolizumab 或 nivolumab 耐药、PD-L1 阳性、复发性或转移性 HNSCC 患者使用他泽司他和pembrolizumab治疗的疗效进行 I/II 期临床试验评估（NCT04624113）。

Goswami 等人证实 CPI-1205 药理学抑制 EZH2 可在体外增加效应样 T 细胞反应，并增强抗 CTLA-4 疗法在小鼠膀胱癌和黑色素瘤中的有效性，这为 CPI-1205 和伊匹单抗的联合试验提供了强有力的理论基础。然而，CPI-1205 和伊匹单抗在晚期实体瘤患者中的 I/II 期多中心开放标签研究在进入 II 期之前就停止了，并且没有患者入组 II 期（NCT03525795此外，DS3201 联合伊匹单抗正在转移性前列腺癌、尿路上皮癌或肾细胞癌患者中进行 Ib 期临床试验评估，该试验正在招募参与者（NCT04388852）。

多项研究证明，G9a 抑制还可以通过重新表达内源性逆转录病毒，从而诱导病毒模拟和IFN信号传导来增强检查点抑制剂阻断的抗肿瘤活性，从而在临床前癌症模型中增加肿瘤的免疫原性和识别。研究发现，在用 G9a 抑制剂和抗 PD-1 抗体治疗的抗 PD-1 耐药 B16F10 小鼠黑色素瘤模型中，肿瘤生长显著减少，肿瘤消退。从机制上讲，G9a 抑制剂诱导微管相关蛋白 1轻链 3β 表达，从而调节自噬过程。因此，Kelly 等人提出 G9a 抑制可以提高疗效或增加对检查点抑制剂治疗有反应的黑色素瘤患者比例。铂类化疗后病情进展的晚期膀胱癌患者预后不良，治疗选择有限。抗 PD-L1 免疫检查点抑制剂治疗作为顺铂不适用患者的二线治疗已被证明可以提高生存率，20%–30% 的患者有反应。Paramio 及其同事提出了使用表观遗传抑制剂和 ICB 联合治疗膀胱癌的新且有希望的机会。他们发现 CM-272 可以增强内源性抗肿瘤免疫反应并诱导免疫原性细胞死亡，同时增加组织内 CD8/调节性 T 细胞的比例。这些影响表明冷免疫肿瘤转化为热肿瘤，后者可能更容易对 ICI 作出反应。

约 22% 的生发中心B 细胞样 DLBCL 亚型患者携带 EZH2 获得功能突变。Park 等人证明 GSK126 与泊马度胺的组合通过促进 EZH2 获得功能突变的 DLBCL 中的 B 细胞分化和凋亡来协同抑制肿瘤生长。

5. 结论和未来展望

本综述总结了 KMT 抑制剂疗法的最新和最有希望的进展，重点介绍了 KMT 抑制剂与其他疗法联合用于治疗肿瘤的可能意义。作为癌症治疗的新潜在靶点，KMT 已成为研究的热门话题。KMT 在不同类型癌症中的功能和作用日益增多。多种针对 KMT 的新药正在临床试验中开发和评估。虽然其中大多数仍处于临床前研究或 I/II 期临床试验阶段，但美国 FDA 在不到六个月的时间内两次批准他泽司他，这是表观遗传药物的一个里程碑事件，也预示着 EZH2 抑制剂甚至其他 KMT 抑制剂在肿瘤治疗中的应用前景良好。

此外，本综述探讨的研究表明，KMT 抑制剂与化疗、靶向药物和免疫疗法之间存在协同作用，可以减轻与个体治疗方案相关的耐药性发展和毒性作用。值得注意的是，组蛋白甲基化已显示出通过抵消肿瘤和TME的免疫逃逸机制来克服 ICB 耐药机制的最大潜力。与目前的免疫疗法一样，KMT 抑制剂对TME的影响不仅可能因不同癌症而异，而且可能因同一癌症类型的个体而异，在设计联合试验时必须考虑到这一点。

我们预计，在未来十年内，针对 KMT 的药物将迅速增加寻找新靶点和探索其他潜在治疗应用的努力。此外，如果进一步探索不同翻译后组蛋白修饰甚至其他表观遗传修饰之间的串扰，肿瘤患者的精准治疗可能会得到改善。这些突破最终可能不仅使肿瘤患者受益，而且还会使患有各种疾病的患者受益。然而，KMT 抑制剂和其他表观遗传药物仍存在很大的不确定性，需要更多的临床试验来验证其疗效和安全性。此外，EZH2 在几种癌症中的具体位点和作用机制仍未完全阐明，仍有待探索。许多研究表明 G9a 在肿瘤免疫中的调节功能，将 G9a 抑制剂与 ICI 相结合可能是一种潜在的策略，值得进一步的临床试验。涉及表观遗传药物的联合策略可能是癌症治疗的又一个垫脚石。